Morfología, grupos de compatibilidad vegetativa, patogenicidad y patrones moleculares de Fusarium spp. aislados de ajo y cebolla

Abstract

La podredumbre basal que afecta cebolla y ajo es una enfermedad importante en las zonas productoras de Argentina. F. oxysporum f. sp. cepae se cita como el principal agente causal pero otras especies de Fusarium también producen esta enfermedad. Ochenta y un aislamientos de Fusarium spp. provenientes de localidades productoras de las provincias de Mendoza, San Juan, Buenos Aires y Río Negro se caracterizaron por macro y micromorfología sobre los medios APD y AHC. Cincuenta y un aislamientos se identificaron como F. oxysporum, 16 como F. proliferatum, 7 como F. verticillioides, 5 como F. solani, uno como F. compactum y uno como Fusarium sp. F. oxysporum fue la especie más frecuentemente aislada tanto en cebolla como en ajo. Se determinó que la tasa de crecimiento diario de las colonias en APD fue significativamente diferente entre aislamientos, siendo el promedio de la tasa de los aislamientos de cebolla significativamente mayor que el de los de ajo. Se estableció además, una amplia variabilidad entre aislamientos y entre especies. Con 48 aislamientos de cebolla se comprobó la patogenicidad a través de la inoculación artificial de raíces de cebolla con suspensiones de 107 conidios/ml. Estos ensayos evidenciaron variabilidad significativa entre aislamientos y especies. La patogenicidad de 21 aislamientos de ajo se probó en plantas por inmersión de raíces con suspensiones de 107 conidios/mL y en dientes por inoculación en una herida con una suspensión de 5 x 106 conidios/ml. Se halló variabilidad entre aislamientos pero no entre especies y se determinó una asociación significativa entre los dos métodos empleados. F. oxysporum, F. proliferatum, F. verticillioides, F. so/ani, F.compactum y Fusarium sp. resultaron patógenos en cebolla mientras que F. oxysporum, F. verticillioides y F. proliferatum además lo fueron tanto en plantas como en bulbos de ajo. Se realizaron pruebas de complementación de mutantes auxotróficos de F. oxysporum obtenidos en PDC y MMC. Como resultado de este estudio se determinó que 28 aislamientos pertenecieron a 7 grupos de compatibilidad vegetativa (GCV), el resto fue miembro de un único GCV. Además 5 aislamientos fueron autoincompatibles. Estos resultados indican que F. oxysporum corresponde a la forma especial cepae aunque con gran variabilidad entre aislamientos. No se encontró asociación entre el GCV con el origen, ni con el nivel de patogenicidad del aislamiento. Por la técnica de ERIC-PCR se generaron patrones de bandas polimórficos en todas las especies de Fusarium. Esta técnica detectó variabilidad genética dentro de las especies de manera eficiente, pero no fue útil para diferenciar especies. El alto grado de diversidad observado con ERIC-PCR en F. oxysporum coincidió con los resultados obtenidos por la técnica de GCV. F. verticillioides exhibió la mayor variabilidad genética en cambio F. proliferatum manifestó baja variabilidad. Independientemente del origen tres aislamientos de F. solani tuvieron el mismo patrón de bandas. Este trabajo representa la primer referencia en Argentina, de F. verticillioides como agente causal de podredumbre basal de cebolla en San Juan y de ajo en Mendoza. También se cita a F. compactum en cebolla, en Río Negro.

Basal rot that affect both onion and garlic, is an importan! disease from different growing areas of Argentina. F. oxysporum f. sp. cepae was cited like the principal agent causal but other species of Fusarium are know producing this disease too. Eighty one isolations of Fusarium coming from Mendoza, San Juan, Buenos Aires and Río Negro, were characterized by macro and micro morphology on PDA and CLA. Fifty one isolates were identified as F. oxysporum, 16 as F proliferatum, 7 as F. verticillioides, 5 as F. solani, one as F. compactum and one Fusarium sp. F. oxysporum was the one most frequently isolated as !he causal agent for basal rot in onion and garlic. Diary growth rate were determined on PDA and differences were found among isolates, the average growth rate of isolates from onion was significantly greater !han !hose from garlic. high variability was determined between the isolates and among species. Pathogenicity was verified trough inoculations of root of onion plan! through 48 isolates from that vegetable were soaked in a suspension of 107 conidia per milliliter. This test proved variability between isolations and species. The pathogenicity of 21 isolates from garlic was tested by soaked of the roo! from garlic with a suspension of 107 conidia per milliliter and in injured garlic cloves by inoculation with suspension of 5 x 106 conidia per milliliter. Variability was found among isolates but not by species. Furthermore a significant association was determined testing the pathogenicity of the isolates on garlic plants and cloves. F. oxysporum, F. proliferatum, F. verticil/ioides, F. solani, F.compactum and Fusarium sp. were pathogen on onion whereas F. oxysporum, F. verticillioides and F. proliferatum showed pathogenicity on garlic plants and bulbs. By means of auxotrophic mutants from F. oxysporum obtained on PDC and MMC, complementation test were made. lt was determined that 28 isolates belonged to 7 VCG, meanwhile the remaining isolates were single member of a group. Moreover 5 isolates were self-incompatible. These result showed that F. oxysporum can belong to a special form cepae even though a substantial amount of variations among isolates. Association between VCG by source or by pathogenicity level was not found. Polymorphic patterns of band from each isolates were generated by ERI-PCR in all Fusarium species. This technique was enable to assess variability in the species, but not was helpful among them. A diversity degree was found by ERIC-PCR in F. oxysporum the results was the same that were obtain by VCG. F. verticillioides showed high genetic variability by ERIC-PCR technique it was opposite with F. proliferatum that sowed low variability. lndependently about the origin three isolates of F. solani from Mendoza, San Juan and Buenos Aires have got the same pattern of bands. Finally, it was reported at first time in Argentina, that F. verticillioides caused basal rot on onion from San Juan and on garlic from Mendoza and too for F. compactum on onion from Rio Negro.