Dinámica poblacional de Xanthomonas axonopodis pv. citri, bacteria causal de la cancrosis de los citrus, en condiciones endémicas

Abstract

La cancrosis de los citrus, es una enfermedad bacteriana que afecta a las especies de citrus y otros géneros de Rutaceas. La difusión es mundial pero ciertas áreas están libres, como los países del Mediterráneo. En la Argentina se halla en el Litoral mientras el noroeste (NOA) está aún libre. Los síntomas son lesiones corchosas en hojas, espinas, ramas y frutos. Los cancros en frutos disminuyen su calidad comercial y no son aceptados por los mercados más exigentes. La Unión Europea ha impuesto en los últimos años restricciones a la importación de fruta de zonas con cancrosis, y exige certificación de lotes libres. En Argentina la producción para exportación se realiza en lotes "de sanidad controlada" para obtención de frutos libres de síntomas y de la bacteria causal, cosechados luego de cumplir los requisitos de certificación. Este trabajo se inició para desarrollar métodos de detección y determinar los niveles poblacionales de Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) en plantas u órganos sanos y en plantas u órganos enfermos con síntomas. Esto permitirá dilucidar el potencial de la fruta, obtenida en diferentes sistemas, como portadora de la bacteria causal de la cancrosis. Se registraron los niveles poblacionales de Xac en hojas y frutos con y sin síntomas de cancrosis, muestreados en lotes con alta y baja infección, con y sin tratamiento químico, y obtenidos en galpón de empaque sin procesar y procesados. Se determinó la población de Xac en lesiones obtenidas de frutos en distintas condiciones y en material de desechos de una planta extractora de jugo. Se seleccionaron medios semiselectivos para cuantificación de Xac en las muestras, en lesiones y como epífitas en hojas y frutos. Se detectó Xac mediante diluciones en medio agar lima bean adicionado con kasugamicina, extracto de levadura y cicloheximida y se cuantificaron las poblaciones patogénicas por infiltración en hojas susceptibles de pomelo. La mayor población de Xac se obtuvo en hojas testigo de pomelo con lesiones, sin embargo, la variabilidad fue alta. Fue notable la diferencia poblacional de Xac en muestras de hojas sanas extraídas en quintas muy infectadas y en quintas con baja infección. En hojas sanas de quintas con baja infección no se detectó Xac en medio semiselectivo y sólo por infiltración se obtuvieron menos de 1,02x10 bacterias por hoja. Los resultados obtenidos comprueban que es muy baja o no detectable la presencia de Xac en hojas sin lesiones, en quintas con baja infección. De acuerdo con los resultados obtenidos, en citrus existe una gran diferencia poblacional, superior a 1000 veces, entre hojas individuales. En muestreo de frutos se detectó la mayor población de Xac en aquellos provenientes de quintas infectadas, sin tratamiento químico. La mayor población en medio semi-selectivo se obtuvo de frutos testigo de pomelo con síntomas (2,3x106 colonias/fruto). Fue relativamente alta la población en frutos de pomelo sin síntomas, obtenido de plantas con alta infección (promedio de 5,0x105 bacterias por fruto). Por infiltración, la mayor población se encontró en limón Eureka testigo (con síntomas), un promedio de 6,7x105 células de Xac por fruto. En fruto sano de limón se encontró 2,2x103. La diferencia de población bacteriana detectada mediante medios semiselectivos e infiltración de hojas de pomelo se debe, posiblemente, al crecimiento de otras bacterias que impiden la detección de Xac en las cajas. En frutos sanos extraídos de quintas con baja infección con y sin tratamiento químico de control no se detectó Xac por ningún método y en ninguna de las muestras. La población de Xac en frutos en galpón de empaque fue variable, luego del lavado y encerado, la menor población se encontró en naranja y la mayor en pomelo.

Citrus canker is an important disease that occurs in all citrus and other genera of the Rutacea family. Occurence of the disease is worldwide, although the citrus producing countries of the Mediterranean area are free of canker. In Argentina, the Northeastern region of the country is affected whereas in the Northwestern region the disease was never detected. Symptoms of the disease are corky lesions on leaves, thorns, twigs, and fruits. The occurence of canker lesions on the fruit rind decrease the commercial quality and infected fruit is not accepted by the most important markets. In the last years quarantine restrictions have been imposed to the citrus production from canker-affected areas by the countries of the European Union. Certification of the fruit is required, this includes the production in canker-symptoms-free plots. The certified fruit-production plots have been started in the Northeast of Argentina. This work was initiated to develop methods of detection and to detemine the populations of Xanthomonas axonopodis pv. citri in healthy and diseased plants and plant parts. Obtained the results will help in finding the potential of the fruit from different production systems as carriers of the canker-causing organism. Populations of Xac were determined on leaves and fruits, with and without symptoms, from plants with high and low disease intensity, sprayed and non-sprayed for canker control. Samples of processed and non-processed fruits were also taken from a packing house that used washing and waxing as the only treatment. Populations were investigated in waste from citrus- juiceprocessing factories. The semiselective medium ALB+K+EL (lima bean agar plus cicloheximide, kasugamycin, and yeast extract) was found to be effective in recovering the Xac cells from different sources. Injection-infiltration of the same samples in susceptible Duncan grapefruit and Key lime young leaves induced lesions in numbers that were compared to an infectivity titration experiment and were useful in detecting and quantifying the Xac pathogenic populations. Highest populations were obtained from diseased leaves and fruits, although the bacterial numbers were highly variable. Leaves and fruits without lesions and harvested from plots with high disease intensity also carried generally high Xac populations, except for some samples as those of Valencia orange. On the contrary, leaves and fruits without lesions obtained from low disease intensity plots carried very low populations of Xac, some samples yielded no Xac cells or they were at non-detectable levels. Populations of Xac on unselected fruits from packing houses without treatment for Xac were highly variable. Highest bacterial numbers were from grapefruit and lowest from oranges. When individual lesions were analized from citrus waste of juice processing plants, some of them showed non Xac cells, especially in grapefruit; bacterial numbers from lemon were the highest and less variable. The results presented here will help in understanding the population dynamic of Xac in citrus tissue and will increase the scientific basis to produce Xac-free citrus fruits in areas were citrus is endemic.