Análisis de protocolos de extracción de ADN para detectar eventos transgénicos en alfalfa (Medicago sativa L.)

Abstract

La alfalfa (Medicago sativa L.) es un cultivo forrajero importante en la provincia de Santiago del Estero. En la última década, la alfalfa transgénica tolerante al herbicida glifosato® fue introducida ilegalmente en Argentina, provocando una gran contaminación de semillas. El objetivo del trabajo fue evaluar la eficiencia de 3 métodos de extracción de ADN en diferentes tipos de tejido de alfalfa (semilla, hoja fresca, heno) y obtener plantas libres de eventos transgénicos J101 y/o J163 en el cv. Salinera INTA. Se realizó la extracción de ADN, se determinó la concentración y pureza del mismo mediante espectrofotometría, y la integridad mediante electroforesis en geles de agarosa. A su vez se determinó el porcentaje de amplificación para cada protocolo mediante PCR. Se sembraron 600 semillas y se conformaron 18 bulks, de 30 a 40 plantas cada uno, y se analizó la presencia de los eventos mediante tiras reactivas y PCR. Las plantas negativas para la presencia de los eventos por ambas técnicas fueron trasplantadas a campo. El trabajo realizado permitió determinar el mejor método de extracción para cada tejido en alfalfa, y obtener un pool de plantas del cultivar Salinera INTA libres de los eventos transgénicos evaluados, para posterior multiplicación de semillas.

Alfalfa (Medicago sativa L.) is an important forage crop in the province of Santiago del Estero. In the last decade, transgenic alfalfa tolerant to the herbicide glyphosate ® was illegally introduced into Argentina, causing extensive seed contamination. The aim of this work was to evaluate the efficiency of 3 DNA extraction methods in different types of alfalfa tissue (seed, fresh leaf, hay) and obtain plants free of J101 and/or J163 transgenic events in the cv. Salinera INTA. DNA extraction was performed. The concentration and purity of the DNA was determined by spectrophotometry, and the integrity by electrophoresis in agarose gels. In turn, the percentage of amplification for each protocol was determined by PCR. Then, 600 seeds were sown, and 18 bulks were formed, with 30 to 40 plants each, and the presence of the events was analyzed using reagent strips and PCR. Plants in which the target events were not detected were transplanted to the field. The work carried out allowed us to determine the best extraction method for each tissue in alfalfa, and to obtain a pool of plants of the cv. Salinera INTA free of the transgenic events evaluated, for subsequent seed multiplication.