Desarrollo de poblaciones mutagenizadas en girasol

Abstract

Desde hace unos años el grupo de girasol del INTA ha incorporado poblaciones mutagenizadas como herramienta de suministro de nueva variabilidad y de aplicación de genética reversa y directa. Dada la importancia de contar con esta herramienta, se planteó el objetivo de determinar el efecto de distintos tratamientos mutagénicos sobre tres genotipos de girasol y evaluar de forma integrada su capacidad de supervivencia, fertilidad y generación de mutaciones heredables. Se aplicaron cinco tratamientos (A- EMS 0,1%, B- EMS 0,125%, C- Rayos X (15 kR) + azida sódica 10-4 M, D- Rayos X (15 kR) + azida sódica 10-3 M y E- control) en tres líneas endocriadas (HA89, PAC2 y 51084), generando cuatro réplicas de 100 semillas para cada combinación genotipo-tratamiento. Sobre ellas se midió la tasa de germinación. Se trasplantaron a campo 35 plántulas por réplica, y sobre ellas se midió la proporción de plantas con capítulo y la proporción de plantas con semilla viable. En cada variable estudiada se observó una respuesta diferencial de los genotipos a los distintos tratamientos. Los cuatro primeros tratamientos produjeron 198, 254 y 195 familias M2 de las líneas HA89, 51084 y PAC2, respectivamente. Se realizó una evaluación genotípica preliminar sobre 8 familias M2 HA89-B (48 individuos) mediante una PCR multiplexada usando tecnología de microfluídica (Access Array, Fluidigm, EEUU) acoplada a secuenciación de alto rendimiento (Illumina). Se relevaron 48 regiones génicas (análisis de 696040 nucleótidos) con una tasa de mutaciones tentativa de 1/39 kb. Para la generación de semilla M3 se sembraron 35 semillas de cada familia M2 de la línea HA89 en los tratamientos B y D, y 5 semillas de cada familia M2 para el resto de las combinaciones genotipo tratamiento, observando variabilidad fenotípica entre algunas plantas hermanas. Actualmente se avanzó hasta semilla M4 en las familias HA89-B y HA89-D.