Puesta a punto del método de extracción de adn con CTAB en alfalfa (Medicago sativa L.).

Abstract

Para cualquier tipo de análisis molecular por PCR (Polymerase Chain Reaction) se requiere un buen método de extracción de ADN, que permita obtener tanto una cantidad significativa como una alta calidad del mismo. En base a referencias bibliográficas, el método que emplea CTAB (Bromuro de cetil - trimetil amonio) como agente extractivo es el más utilizado en muestras verdes de alfalfa. El principio de extracción consiste en que el CTAB produce la disgregación de las membranas celulares, dando origen a la ruptura celular. El buffer de extracción, además de contener CTAB, cuenta con polivinilpirrolidona (PVP) que elimina los polifenoles y β – mercaproetanol que desnaturaliza proteínas. Este método no sólo facilita la extracción, sino también permite obtener una mejor limpieza del ADN, eliminando compuestos secundarios o polisacáridos que puedan interferir luego con su amplificación. El objetivo del siguiente trabajo consistió en poner a punto el método de extracción con CTAB para la obtención de ADN a partir de hojas de alfalfa maceradas en nitrógeno líquido o liofilizadas.