Amebas de Vida Libre, con énfasis en Acanthamoeba y Naegleria, y bacterias del orden Chlamydiales como agentes infecciosos en rumiantes mayores

Abstract

Se estudió la presencia de Amebas de Vida Libre (AVL) (Acanthamoeba spp. y Naegleria spp.), y bacterias del orden Chlamydiales como agentes infecciosos en bovinos de la provincia de La Pampa, Argentina. Se obtuvo desarrollo de AVL en el 83,07 % de las muestras de agua destinada a consumo bovino (N=65). Se identificó por cultivo y técnicas moleculares la presencia de Acanthamoeba spp. en el 24,07 %. Se identificaron los genotipos T4, T5 y T15 del género Acanthamoeba. No se encontró asociación entre queratitis con la presencia de AVL. No se detectaron AVL del género Naegleria. Se estudiaron 709 muestras bovinas, para detectar la presencia de bacterias del orden Chlamydiales, y 656 sueros bovinos para estimar la prevalencia de infección por estas bacterias. Se detectó ADN de familia Chlamydiaceae en el 4,78 % de las muestras de órganos parafinados provenientes de pérdidas reproductivas y de Chlamydia abortus en el 1,99 % (N=251). Se determinó una prevalencia de anticuerpos séricos contra Chlamydia abortus del 25,00 % sobre 128 lotes bovinos, con una seroprevalencia individual (N=656) del 8,07 %. No se encontraron diferencias significativas entre categoría. Se detectó un 6 % de ADN del orden Chlamydiales y 2 % de la familia Chlamydiaceae sobre 50 muestras oculares de terneros estudiadas. Se identificó por secuenciación la presencia de Uncultured Chlamydiales. Se detectó ADN del orden Chlamydiales en el 30,76 % de las 104 muestras de cérvix estudiadas y el 3,84 % correspondió a la familia Chlamydiaceae. No se encontraron diferencias significativas entre las prevalencias de hembras con y sin problemas reproductivos a nivel de orden, pero si a nivel de familia. Se detectó en un 8% (1 muestra) de lavado de útero de vacas donadoras de embriones, ADN a nivel de orden Chlamydiales y de familia Chlamydiaceae sobre 12 muestras estudiadas. Se detectó ADN del orden Chlamydiales en el 30,00 % de las muestras de semen de toros de cabañas estudiadas y de familia Chlamydiaceae en el 6,00 % (N=50). Se detectó ADN del orden Chlamydiales en el 23,33% de las muestras de esmegma prepucial de toros provenientes de cabañas y servicio natural estudiadas (N=150). La familia Chlamydiaceae fue identificada en el 4,66% de ellas. Se encontraron diferencias significativas entre toros en servicio natural y de cabaña solo a nivel de orden. Se detectó ADN del orden Chlamydiales en el 4,76% de muestras de órganos formolados de fetos abortados y ADN de la familia Chlamydiaceae en el 2,38% de ellas (N=42). Se detectó en 50 muestras de órganos de fetos no abortados ADN del orden Chlamydiales en el 20,00 % y 10,00 % de la familia Chlamydiaceae. Se identificó por secuenciación la presencia de una clamidia ambiental (Neochlamydia spp.) en un cultivo de Acanthamoeba spp. (genotipo T5), probablemente como endosimbionte. Los resultados obtenidos indican la necesidad de profundizar el estudio de las AVL y las clamidias en ambientes ganaderos como agentes infecciosos con potenciales características zoonóticas.

The aim of this study was to evaluate the presence of free-living amoebae (FLA) (Acanthamoeba spp. and Naegleria spp.) and bacteria of the order Chlamydiales as infectious agents in cattle in the province of La Pampa, Argentina. FLA was isolated from 83.07% of the watering trough samples. The identification by Polymerase chain reaction was performed with genus-specific primers and followed by direct sequencing. The sequencing revealed the presence of genotypes T4, T5, and T15 of the genus Acanthamoeba in the samples studied. No association was found between keratitis and the presence of FLA. No FLA of the genus Naegleria was detected. A total of 709 bovine samples collected from paraffined organs of reproductive loss, eye, cervix, washing of uterus from cow donating embryos, semen, preputial smegma, formalin-fixed organs from aborted fetuses and organs from unborn were studied to detect the presence of bacteria of the order Chlamydiales.To assess the prevalence of infection by these bacteria serum samples from 656 cattle were analyzed for the presence of specific IgG antibodies. DNA of the family Chlamydiaceae was detected in 4.78 % of sample paraffin organs proceeding of reproductive loss and Chlamydia abortus in 1.99 % (N=251). Antibodies to Chlamydia abortus were found in 8.07% sera based on ELISA result (N= 656). The overall herd prevalence of anti-Chlamydia abortus antibodies in 128 bovine lots was 25.00%. No significant differences were found between categories. Six percent of DNA bacteria of the order Chlamydiales and 2 % of the family Chlamydiaceae were detected on 50 eye samples of calves studied. The presence of Uncultured Chlamydiales was identified by sequencing. DNA of the order Chlamydiales and the family Chlamydiaceae was detected in 30.76% and 3.84 % of the cervix samples studied (N=104). No significant differences were detected between the prevalence of females with and without reproductive problems at the order level, but yes at the family level. One of 12 samples (8.00%) of washing of uterus of cow donating embryos, DNA was detected at order and family level. DNA of the order Chlamydiales and the family Chlamydiaceae was detected in 30.00% and in 6.00% of the semen samples studied (N=50). The order Chlamydiales DNA was detected in 23.33% of the preputial smegma sample of bulls from breeders and natural service studied (N=150). DNA of the family Chlamydiaceae was identified in 4.66% of them. Significant differences were found between bulls in natural service and breeders only at the order level. DNA of the order Chlamydiales and the family Chlamydiaceae was detected in 4.76 % and 2.38 % of formalin-fixed organ samples of aborted fetuses (N=42). In unborn organ samples, DNA of the order Chlamydiales was detected in 20.00 %. The family Chlamydiaceae DNA was detected in 10% (N=50). The presence of Chlamydia-like organism in an Acanthamoeba spp. (genotype T5) was identified by sequencing, probably as an endosymbiont. The results obtained indicate the need to carry out more studies of FLA and chlamydia in cattle ranch environments as infectious agents with potential zoonotic characteristics