Diagnóstico de abortos y muertes perinatales en ovinos en diferentes regiones de Argentina y estudio de la seroprevalencia aparente de Chlamydia abortus y Leptospira spp. en tambos ovinos de la provincia de Buenos Aires

Abstract

En Argentina existen alrededor de 15.000.000 de ovinos, 80% de los cuales se encuentran ubicados en la Patagonia, el resto se distribuye principalmente en las regiones Pampeana, Mesopotámica y Noroeste. A nivel mundial, las pérdidas reproductivas son una de las principales limitantes de la producción ovina, pero estas mermas se encuentran poco documentadas en Argentina. En otros países los abortos en ovinos son provocados principalmente por agentes infecciosos y protozoarios, muchos de los cuales son zoonóticos. A su vez, las muertes perinatales (corderos que nacen vivos y mueren entre el día 1 y 3 posparto inclusive) son atribuidas principalmente a causas no infecciosas. El aborto enzoótico ovino, causado por Chlamydia abortus, y la leptospirosis, han sido identificadas como causales de pérdidas en otros países, sin embargo, son escasos los antecedentes sobre estas enfermedades zoonóticas en ovinos de Argentina. El objetivo general del presente trabajo fue: Estimar la seroprevalencia aparente de C. abortus y Leptospira spp. en tambos ovinos de la provincia de Buenos Aires e identificar causas bacterianas, protozoarias y no infecciosas de abortos y muertes perinatales en ovinos de Argentina. Se analizaron 485 sueros de ovejas/borregas de las razas Frisona Milchschaf o Pampinta, seleccionados de una seroteca de 1098 muestras de 8 tambos de la provincia de Buenos Aires, determinándose la seroprevalencia aparente de C. abortus mediante ELISA indirecto y de 8 serovares de Leptospira spp. mediante microaglutinación (MAT). Además, se examinaron patológicamente 58 casos (27 fetos abortados por 25 madres -2 pares de mellizos-, 9 de los cuales incluyeron placentas, y 31 corderos ≤3 días de vida) de 15 establecimientos de Buenos Aires (8), Corrientes (5), Santa Fe (1) y Entre Ríos (1). Tejidos y/o fluidos corporales de los 58 casos fueron analizados por histología, pruebas microbiológicas (incluyendo cultivos bacteriológicos y cultivo selectivo para Salmonella spp.), moleculares y serológicas/inmunológicas. Para la detección de Chlamydia spp., se realizó PCR anidada, PCR en tiempo real, inmunofluorescencia directa (IFD) y tinción de Ziehl Neelsen modificada (Stamp), mientras que para la detección de Leptospira spp. se realizó IFD y PCR en tiempo real y para la detección de Campylobacter fetus se realizó IFD. Muestras de tejidos y/o fluidos corporales se usaron para diagnóstico de Toxoplasma gondii y Neospora caninum por PCR e inmunofluorescencia indirecta. Resultados: La seroprevalencia aparente general de C. abortus fue 7,8% (IC95% 6,04-9,6%) a nivel de individuos, encontrándose animales positivos en 100% (8/8) de los establecimientos. Se estableció una asociación estadísticamente significativa (p=0,03) entre la raza Frisona Milchschaf y la mayor probabilidad de presentar serología positiva a C. abortus, sin embargo, se plantea la necesidad de realizar mayores estudios. Esta asociación podría no deberse a la raza sino a que otros factores (manejo, región, ambiente, endemia, etc) son los condicionantes de la presencia de la enfermedad y la raza actúa como factor confundente. No se encontraron seroreactores a ninguno de los 8 serovares de Leptospira spp. (dilución 1/100), indicando una seroprevalencia <4%. En 50% (29) de los 58 casos analizados patológicamente, las muertes se atribuyeron a agentes bacterianos/protozoarios, en 25,8% (15) a causas no infecciosas, y en el 24,1% (14) restante no se pudo establecer el agente causal (casos indeterminados). Sin embargo, 9 de estos casos (15,5% del total y 64,2% de los indeterminados) presentaron lesiones histológicas sugestivas de un agente infeccioso/protozoario y 5 casos (8,6% del total y 35,7% de los indeterminados) presentaron lesiones no sugestivas de agentes infecciosos/protozoarios o no presentaron lesiones. Un 25,8% (15) de las pérdidas se atribuyó a bacterias y 24,1% (14) a protozoos (Toxoplasma/Neospora). Las causas bacterias identificadas fueron Escherichia coli, Leptospira spp., Trueperella pyogenes, Mannheimia haemolytica, Listeria ivanovii, Campylobacter jejuni, y Providencia sp. Los 58 casos (100%) resultaron negativos para C. abortus, C. fetus y Salmonella spp. Las causas no infecciosas identificadas fueron distocias en los fetos, y el síndrome de estrés-inanición-hipotermia y traumas en los corderos. A su vez, entre los casos analizados, los fetos abortados tuvieron mayor probabilidad de ser diagnosticados con una causa bacteriana/protozoaria que los corderos muertos en la etapa perinatal (p<0,05). Mediante este estudio se logró realizar una aproximación diagnóstica de causas bacterianas, protozoarias y no infecciosas de aborto y muerte perinatal en ovinos de Argentina. Sin embargo, sería conveniente realizar estudios más amplios para determinar si las pérdidas continúan presentando similar distribución cuando el número de muestras analizadas incrementa y/o identificar causas no identificadas hasta el momento.

In Argentina there are around 15,000,000 sheep, 80% of which are in the Patagonia region, the remainder are mostly distributed in the Pampean, Mesopotamian and Northwest regions. Reproductive losses are one of the main constraints of sheep production worldwide, but these losses are poorly documented in Argentina. In other countries abortions in sheep are caused mainly by infectious agents and protozoa, many of which are zoonotic. In turn, perinatal deaths (lambs that are born alive and die between day 1 and 3 postpartum) are mainly attributed to non-infectious causes. Ovine Enzootic Abortion caused by Chlamydia abortus, and leptospirosis, have been identified as causes of these losses in other countries; however, there is little information on these zoonotic diseases in sheep from Argentina. The general objective of this work was: To estimate the apparent seroprevalence of C. abortus and Leptospira spp. in sheep farms in the province of Buenos Aires and to identify bacterial, protozoal and non-infectious causes of abortions and perinatal deaths in sheep in Argentina. A total of 485 sera from sheep of the Friesian Milchschaf or “Pampinta” breeds were selected from a collection of 1098 samples from 8 dairy farms in the province of Buenos Aires. The samples were analyzed to determine the apparent seroprevalence of C. abortus by indirect ELISA and of 8 serovars of Leptospira spp. by microagglutination test (MAT). In addition, 58 carcasses ovine carcasses were pathologically examined. These included 27 fetuses aborted by 25 dams (2 pairs of twins), 9 of which included placentas, and 31 1- to 3-day-old lambs from 15 farms in Buenos Aires (8), Corrientes (5), Santa Fe (1) and Entre Ríos (1). Tissue and/or body fluid samples of the 58 cases were analyzed by histology, microbiological (including bacteriological cultures and selective culture for Salmonella spp.), molecular and serological/immunological tests. For the detection of Chlamydia spp., nested PCR, real time PCR, direct immunofluorescence assay (DIF) and modified Ziehl Neelsen staining (Stamp) were performed, while DIF and real-time PCR were performed for the detection of Leptospira spp., and DIF was performed for the detection of Campylobacter fetus. Tissue and/or body fluid samples were used for diagnosis of Toxoplasma gondii and Neospora caninum by PCR and indirect immunofluorescence assay. Results: The general apparent seroprevalence of C. abortus was 7.8% (CI95% 6.04-9.6%) at the individual level and 100% at the farm level. A statistically significant association (p = 0.03) was found between the Friesian Milchschaf breed and C. abortus seropositivity, however, there is a need for further studies. This association might not be due to race but to other factors (management, region, environment, endemic, etc.) are determining the presence of the disease, and race acts as a confounding factor. All sera were negative for the 8 serovars of Leptospira spp. at the 1/100 dilution, indicating that the seroprevalence is <4%. A total of 27 aborted fetuses (4 fetuses from 2 mothers), 9 of which had a placenta, from 25 aborted females and 31 lambs that died at 1-3 days of age were analyzed. In 50% (29) of the 58 pathologically examined cases deaths were attributed to bacterial/protozoal agents, while in 25.8% (15) death was attributed to non-infectious causes, and in the remaining 24.1% (14) it was not possible to establish the causal agent (indeterminate cases). However, 9 of these cases (15.5% of the total and 64.2% of the cases of undetermined causes) had histologic lesions suggestive of an infectious/protozoal agent and 5 cases (8.6% of the total and 35.7% of the indeterminate cases) had lesions not suggestive of infectious agents/protozoa or did not have lesions. In 25.8% (15) of the cases the losses were attributed to bacteria and in 24.1% (14) to protozoa (Toxoplasma/Neospora). The identified bacterial causes were Escherichia coli, Leptospira spp., Trueperella pyogenes, Mannheimia haemolytica, Listeria ivanovii, Campylobacter jejuni and Providencia sp. All 58 cases (100%) were negative for C. abortus, C. fetus and Salmonella spp. The identified non-infectious causes were dystocia in fetuses and the hypothermia-stress-starvation syndrome and trauma in lambs. Among the analyzed cases, aborted fetuses were more likely to be diagnosed with a bacterial/protozoal cause than lambs deceased in the perinatal stage (p <0.05). Through this study we identified bacterial, protozoal and non-infectious causes of abortion and perinatal death in sheep from Argentina. Further studies including larger number of cases are needed to determine if the losses continue to present a similar distribution when the number of cases analyzed increases and/or to identify causes of abortion or perinatal mortality not yet identified in the country.