Influencia de las condiciones de incubación en la detección de anticuerpos contra el Virus de la Leucosis bovina por ELISA = Influence of the incubation conditions on the detection of antibodies to bovine leukemia virus by ELISA

Abstract

En este trabajo se modificaron las condiciones de incubación del ensayo de ELISAp24 que detecta anticuerpos contra el Virus de la Leucosis bovina, con el propósito de evaluar si se reduce el número de resultados falsos y en consecuencia la factibilidad de usarlo con fines diagnósticos confirmatorios, ya que fue desarrollado y validado en nuestro laboratorio para el análisis y monitoreo de seroprevalencia a nivel rodeo y/o para tamizaje de muestras individuales. Se analizaron 128 muestras de suero pertenecientes a 2 rodeos infectados naturalmente de distinto sistema productivo y prevalencia individual, utilizando las condiciones estándar (20-25ºC-30 minutos) y las modificadas (4-8ºC-16-24hs). Los resultados evidencian que las condiciones modificadas no sólo mejoran la capacidad de detección de individuos infectados, sino que disminuyen el número de resultados falsos positivos. Estos hallazgos evidencian la factibilidad de utilizar el ensayo de ELISAp24 como método confirmatorio, y abren camino hacia la realización de un protocolo integral de validación para evaluar su performance diagnóstica, ya que la mejora independiente de la sensibilidad y la especificidad resulta de importancia crítica cuando se utiliza un ensayo para determinar el estado sanitario individual.

The p24ELISA assay has been developed in our laboratory for screening, seroprevalence analysis and/or surveillance of Bovine Leukemia Virus natural infection. In this work we modified the incubation conditions of the p24ELISA, with the final purpose to evaluate if the total number of false results can be reduced. We analyzed 128 samples from cattle of two herds naturally infected, an artificial insemination center and a commercial dairy farm using the previously defined (20-25ºc-30min) and the modified (4-8ºC-16-24hs) incubation conditions. The results show that the modified conditions not only improve the sensitivity but also the specificity of detection, since not only the number of false negative but also false positive results can be reduced. This evidence permits to lucubrate about the factibility to use the p24ELISA system for confirmatory diagnosis, and show the importance to follow up a complete validation protocol to finally evaluate the diagnostic performance of the assay. This is important since the independent modification of sensitivity and specificity is critical when some assay is used for confirmatory diagnosis.