Producción de la proteína recombinante de la cápside del plum pox virus para el desarrollo de nanoanticuerpos

Abstract

El plum pox virus (PPV) produce la enfermedad de Sharka en los frutales de carozo (Prunus sp.), siendo la virosis más devastadora a nivel mundial, al afectar la productividad y la calidad de los frutos, provocando así grandes pérdidas económicas. La raza D de este virus, transmisible por pulgones, afecta a ciruelos y durazneros de las regiones productivas de San Juan y Mendoza. Ello crea la necesidad de disponer de herramientas de diagnóstico eficaces para el control de este virus en el país. El objetivo de este estudio se enfocó en la expresión y purificación de la proteína de la cápside del genoma del PPV para utilizarla como antígeno en la generación de nanoanticuerpos. Para ello, se empleó un vector de expresión, el plásmido pET-15b, se clonó la secuencia codificante de la proteína CP completa, e indujo su expresión con IPTG. El análisis de las fracciones de proteínas solubles y precipitadas indicó que la mayoría de la proteína se produjo en forma de cuerpos de inclusión. La purificación se realizó mediante cromatografía de afinidad (IMAC) con columnas HisTrap HP (Cytiva). La identidad de la proteína se confirmó mediante Western Blot con un antisuero anti-PPV comercial. Como resultado de este trabajo se obtuvo un lote de proteínas apto para la inmunización de camélidos, que permitirá la generación de nanoanticuerpos anti-PPV para inmunodiagnóstico, estudios epidemiológicos, y prospecciones del virus en plantas de viveros y/o montes frutales, constituyendo una herramienta biotecnológica innovadora y con gran potencial en investigación.