Etiología de la enfermedad punta de cigarro en plantaciones de banana en las provincias de Salta y Jujuy

Abstract

El cultivo del banano es una actividad de importancia económica en la región subtropical de las provincias de Salta y Jujuy, desarrollada desde hace más de 70 años. En los últimos años se ha observado en los frutos la presencia de “punta de cigarro”, enfermedad cuarentenaria del tipo A2 (Resol. ex SAGyP N°99/94). La bibliografía internacional cita entre sus posibles agentes causales a Musicillium theobromae, Trachysphaera fructigena, Fusarium spp. y Deigthoniella torulosa. El objetivo de este trabajo fue determinar para la región de Salta y Jujuy la prevalencia e incidencia de la enfermedad, aislar y caracterizar patológica, morfológica, cultural y molecularmente al/los agente/s causal/s. En el verano 2014/2015 se muestrearon completamente al azar por barrido, 363 ha de banano. Se colectaron 40 frutos con síntomas y se calculó la prevalencia e incidencia de la enfermedad. De 137 aislamientos monospóricos obtenidos, se inocularon a frutos sanos, tres aislamientos de Musicillium, diez de Fusarium, tres de Alternaria y tres de Colletotrichum. Se usaron los métodos: 1a) con herida y uso de algodón húmedo, 1b) con herida y uso de algodón seco, 2a) con herida y alta humedad relativa, 2b) con herida sin alta humedad relativa, 3a) sin herida y alta humedad relativa y 3b) sin herida y sin alta humedad relativa. Se estudiaron tres aislamientos patógenos (F*01C3b, F39C1, y F20C4) identificados macro y micromorfológicamente como M. theobromae. Se realizaron RFLPs de la región ITS1/ITS4 con Hae III y Hinf I, del gen β-tubulina con Alu I, Hinf I y Cfo I, y del mtDNA con Hae III. Como controles en las pruebas moleculares se usaron cepas de Verticillium dahliae, por su filogenia cercana al género Musicillium. La prevalencia promedio fue de 15 % (23.3 % en Jujuy y 6.9 % en Salta) y la incidencia promedio fue de 0.12 % y 0.05 % en Jujuy y Salta respectivamente. Los tres aislamientos resultaron patógenos con las metodologías que incluían la herida de frutos sin uso de algodón y se cumplió con los postulados de Koch. Los aislamientos rindieron bandas de 300 a 400 pb en la digestión de productos ITS. El aislamiento F20C4 amplificó con primers específicos de V. dahliae, pero sus RFLPs difirieron de los de este hongo. Solo el aislamiento F39C1 amplificó el gen β-tubulina y la restricción rindió bandas de 400 a 500 pb con Alu I, 300 a 400 pb con Cfo I y 500 a 600 pb con Hinf I. Ningún aislamiento rindió productos de digestión del mtDNA con la enzima Hae III. El análisis multivariado agrupó a los aislamientos estudiados en un mismo cluster, separados de los controles. Se discuten las limitaciones de los métodos moleculares abordados en este trabajo para su uso en la identificación del patógeno M. theobromae.

Banana cropping has been developed since more than 70 years ago and it has an economic importance at the subtropical region in Salta and Jujuy provinces. Last years the “cigar end rot" disease has been observed affecting bananas fruits (quarantine pest type A2, Ex SAGyP Resolution 99/94). The international bibliography cites the pathogens Musicillium theobromae, Trachysphaera fructigena, Fusarium spp. and Deigthoniella torulosa as responsible of this disease. The objective of this work was to determine the prevalence and incidence of the disease in Salta and Jujuy, isolating the causal agent/s, to characterize the pathogenicity and morphology of cultures, and to perform RFLP tests to identify the pathogens. At 2014-2015 summer season, 363 hectares were randomly scanned to collect 40 diseased fruits, recording the disease incidence and prevalence. From 137 monoconidial isolates, three Musicillium isolates, ten Fusarium isolates, three Alternaria isolates and three Colletotrichum isolates, were inoculated to healthy fruits. Different inoculation methods were used: 1a) wound and moist cotton pad, 1b) without wound and dry cotton pad, 2a) wound and wetness, 2b) wound and no wetness, 3a) without wound and wetness and 3b) without wound and no wetness. RFLPs of ITS1/ITS4 regions with Hae III and Hinf I enzimes, β-tubulin gene with Alu I, Hinf I and Cfo I and total mtDNA with Hae III enzyme were performed. The pathogenic isolates F*01C3b, F39C1 and F20C4 (identified as M. theobromae by macro and micro-morphology) were studied. Two strains of Verticillium dahliae were used as controls because their phylogenetic relationship with the Musicillium genus. The prevalence mean was 15 % (23.3 % for Jujuy, 6.9 % for Salta). The incidence mean was 0.12 % for Jujuy and 0.05 % for Salta. The three isolates fulfilled the Koch postulates, being pathogenic when the inoculation methods with wounds and without cotton pads were used. In the digestion of the ITS region, DNA bands ranging from 300 to 400 bp were obtained from the three isolates. The isolate F20C4 amplified a V. dahliae specific PCR band, but its RFLP profiles were different. Only the isolate F39C1 amplified the β-tubulin gene and produced RFLP bands ranging from 400 to 500 bp with Alu I, 300 to 400 bp with Cfo I and 500 to 600 bp with Hinf I were obtained. None isolate showed restriction patterns in the mtDNA digestion with Hae III. A multivariate analysis showed a cluster with the studied isolates, separated from the controls. The limitations of RFLP methods applied in this work to identify the pathogen M. theobromae are discussed.